鼠肿-瘤-坏死因子α(TNF-α)检测试剂盒
2019-09-24
产品详情
- 产地 美国
- 产品名称鼠肿-瘤-坏死因子α(TNF-α)检测试剂盒
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- 简介
EK-E0764Ra 鼠肿瘤坏死因子α（TNF-α）检测试剂盒Rat Tumor Necrosis Factor Alpha ELISA
产品介绍：
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。
测试原理
酶免测定法原理遵循典型的竞争抑制机制。存在于标准样本，对照样本和受测样本中的未标记的抗原与酶标抗原结合物之间相互竞争，争夺与事先包被在微孔板上的数量有限的抗体发生免疫反应的机会，然后通过洗涤和澄清去掉未被结合的物质。洗涤后再加入酶底物， 加入终止液终止酶促反应。吸光度可以通过酶标仪读取。
应用一套标准绘制标准曲线，从曲线上直接读取到受测样本和对照样本中的含量。
操作中的注意事项
1. 在使用本试剂盒之前，使用者要对本说明书有很深刻的了解，严格认真按照操作指南进行操作；
2. 为了评估结果的可靠性，对照样品含量应包含从高到低的各种水平；
3. 当要用到水稀释或重构时，请使用蒸馏水或者去离子水；
4. 为减少与潜在的有害物质接触，在处理试剂盒及人的样本的时候请戴上手套；
5. 所有试剂在使用前拿到室温下温和摇匀，避免反复冻融试剂和样本；
6. 在每次运行前确定校准曲线；
7. 每次检测时都应该包含校准液，并确保其检测值落在可信任区间内；
8. 不规范的程序操作，不 的吸取，不充分的洗涤以及不正确的储存都有可能导致测试值不在确定的范围内；
9. 读取微孔板时，微孔板中如果出现气泡将会影响吸光密度（OD 值），所以在读数前请小心移去微孔板中的气泡；
10. 底物溶液TMB 有很强的光敏感性，应保持避光保存。如果发现溶液现蓝色，可能是由于不稳定或者已经被污染，溶液将不能再使用；
11. 在调制底物溶液和终止液时，不要使液体接触到吸管的金属；
12. 为了避免污染，请使用一次性吸嘴吸取各种试剂和样品，对照样品等；
13. 切勿将不同批次的试剂组合使用，不使用任何过期产品；
14. 试剂盒必须当成是危险废弃物并遵照国家有关制度进行销毁。
限制性说明
1. 试剂盒中的所有试剂是为直接测定样本中被检测物含量校准的，不能用于其他物种。
2. 不能使用严重溶血、脂血、黄疸或者保存失当的血清样本。
3. 任何含有样本或对照血清含有叠氮或硫柳汞都不适合本试剂盒套组，因为这样可能导致错误的结果。
4. 只有校准器A 适合稀释任意高含量血清样本，使用其他任何试剂可能导致错误的结果。
5. 试剂盒的结果不能作为临床诊断的 依据。
安全注意事项
在准备准备样品和对照样品时所使用的人血清，经测试过没有发现乙型肝炎表面活性抗原，也没有发现丙型肝炎抗体的，而且艾滋病毒测试呈阴性。但无论如何，没有任何测试方法可以保证 不含任何乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒，艾滋病毒或者其他病毒，所以这些试剂应被当做潜在的生物危险品处理，并和其他的血样样品一样处理。
检测流程
样本预处理：不需要
使用前将所有试剂恢复到室温状态，准备校准液、参照样本和待测样本，一式几份。一旦开始，直到测试完中间不能中断。
1. 配制检测样本-HRP 结合物溶液和洗涤液。
2. 取出所需数量的微孔条。将不用的微孔条重新封装好放回冰箱。
3. 将各种校准液，参照样品和受测样品各吸取20μl 到相应的已做好标记的孔里面。
4. 吸取100μl 的结合物工作液到添加到每个孔（推荐使用多通道吸管）。
5. 室温下在板振动筛（大约200 转/分钟）下孵育45 分钟。
6. 用300μl 稀释的洗涤液冲洗所有的孔三次，用吸水纸吸干板上所有水分，并确保其被吸干。建议使用清洗器。
7. 吸取150μl 的TMB 底物溶液滴入到所有的孔中，并在中间间隔一段固定时间。
8. 室温下在板振动筛孵育15-20 分钟或者直到校准液A 呈现深蓝色，得到理想OD值。
9. 吸取50μl 的终止液滴到所有孔，间隔时间与第7 步相同。
10. 加入终止液20 分钟后，用微孔板读数器读取在450nm 滤光片下板孔的OD值。
计算
1. 计算每种校准液所有重复检测样本的平均OD 值
2. 以OD 值为Y 轴，校准液的浓度为X 轴在半对数坐标纸上绘制校准曲线。如果有免疫测试软件，推荐使用4 参数曲线。
3. 计算待测样本所有重复检查样本的平均OD 值
4. 在校准曲线上直接读出待测样本的OD 值
5. 如果样品的读数超过60μg/dl,将其与校准液A 以不超过1：8 的比例稀释，所得结果乘以稀释倍数。
注意事项
本检测试剂盒只能作为研究专用，请勿作诊断或其他用途！
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